caa a22 4500 605499527 CHVBK 20210128100551.0 cr unu---uuuuu 210128e20151001xx s 000 0 eng 10.1007/s00253-015-6593-2 doi (NATIONALLICENCE)springer-10.1007/s00253-015-6593-2 Expression, purification, and characterization of a bifunctional 99-kDa peptidoglycan hydrolase from Pediococcus acidilactici ATCC 8042 [Elektronische Daten] [Israel García-Cano, Manuel Campos-Gómez, Mariana Contreras-Cruz, Carlos Serrano-Maldonado, Augusto González-Canto, Carolina Peña-Montes, Romina Rodríguez-Sanoja, Sergio Sánchez, Amelia Farrés] Pediococcus acidilactici ATCC 8042 is a lactic acid bacteria that inhibits pathogenic microorganisms such as Staphylococcus aureus through the production of two proteins with lytic activity, one of 110kDa and the other of 99kDa. The 99-kDa one has high homology to a putative peptidoglycan hydrolase (PGH) enzyme reported in the genome of P. acidilactici 7_4, where two different lytic domains have been identified but not characterized. The aim of this work was the biochemical characterization of the recombinant enzyme of 99kDa. The enzyme was cloned and expressed successfully and retains its activity against Micrococcus lysodeikticus. It has a higher N-acetylglucosaminidase activity, but the N-acetylmuramoyl-l-alanine amidase can also be detected spectrophotometrically. The protein was then purified using gel filtration chromatography. Antibacterial activity showed an optimal pH of 6.0 and was stable between 5.0 and 7.0. The optimal temperature for activity was 60°C, and all activity was lost after 1h of incubation at 70°C. The number of strains susceptible to the recombinant 99-kDa enzyme was lower than that susceptible to the mixture of the 110- and 99-kDa PGHs of P. acidilactici, a result that suggests synergy between these two enzymes. This is the first PGH from LAB that has been shown to possess two lytic sites. The results of this study will aid in the design of new antibacterial agents from natural origin that can combat foodborne disease and improve hygienic practices in the industrial sector. Springer-Verlag Berlin Heidelberg, 2015 Peptidoglycan hydrolase nationallicence Pediococcus acidilactici ATCC 8042 nationallicence N -acetylmuramoyl-L-alanine amidase nationallicence N -acetylglucosaminidase nationallicence 4-Nitrophenyl N -acetyl-β- d -glucosamine nationallicence Zymogram nationallicence García-Cano Israel Departamento de Alimentos y Biotecnología, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut Campos-Gómez Manuel Departamento de Alimentos y Biotecnología, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut Contreras-Cruz Mariana Departamento de Alimentos y Biotecnología, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut Serrano-Maldonado Carlos Departamento de Alimentos y Biotecnología, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut González-Canto Augusto Departamento de Medicina Experimental, Facultad de Medicina, Universidad Nacional Autónoma de México y Hospital General de México, 06720, México D.F., México aut Peña-Montes Carolina Departamento de Alimentos y Biotecnología, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut Rodríguez-Sanoja Romina Departamento de Biología Molecular y Biotecnología, Instituto de Investigaciones Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut Sánchez Sergio Departamento de Biología Molecular y Biotecnología, Instituto de Investigaciones Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut Farrés Amelia Departamento de Alimentos y Biotecnología, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut Applied Microbiology and Biotechnology Springer Berlin Heidelberg 99/20(2015-10-01), 8563-8573 0175-7598 99:20<8563 2015 99 253 https://doi.org/10.1007/s00253-015-6593-2 text/html Onlinezugriff via DOI BK010053 XK010053 XK010000 Metadata rights reserved Springer special CC-BY-NC licence nationallicence 1 research-article jats NATIONALLICENCE NATIONALLICENCE NL-springer NATIONALLICENCE 856 40 https://doi.org/10.1007/s00253-015-6593-2 text/html Onlinezugriff via DOI NATIONALLICENCE 700 1- García-Cano Israel Departamento de Alimentos y Biotecnología, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut NATIONALLICENCE 700 1- Campos-Gómez Manuel Departamento de Alimentos y Biotecnología, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut NATIONALLICENCE 700 1- Contreras-Cruz Mariana Departamento de Alimentos y Biotecnología, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut NATIONALLICENCE 700 1- Serrano-Maldonado Carlos Departamento de Alimentos y Biotecnología, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut NATIONALLICENCE 700 1- González-Canto Augusto Departamento de Medicina Experimental, Facultad de Medicina, Universidad Nacional Autónoma de México y Hospital General de México, 06720, México D.F., México aut NATIONALLICENCE 700 1- Peña-Montes Carolina Departamento de Alimentos y Biotecnología, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut NATIONALLICENCE 700 1- Rodríguez-Sanoja Romina Departamento de Biología Molecular y Biotecnología, Instituto de Investigaciones Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut NATIONALLICENCE 700 1- Sánchez Sergio Departamento de Biología Molecular y Biotecnología, Instituto de Investigaciones Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut NATIONALLICENCE 700 1- Farrés Amelia Departamento de Alimentos y Biotecnología, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, México D.F., México aut NATIONALLICENCE 773 0- Applied Microbiology and Biotechnology Springer Berlin Heidelberg 99/20(2015-10-01), 8563-8573 0175-7598 99:20<8563 2015 99 253